仪器操作规程

18. ÄKTApurifier层析仪使用操作规程
来源:本站    发布时间:2013-2-1 17:27:46    点击数量:844
1 开机

打开仪器的主电源,打开电脑电源。待仪器自检完毕(CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁)。双击桌面上UNICORN图标,进入操作界面。

3 准备工作溶液和样品

所有的工作溶液和样品必须经过0.45m的滤膜过滤,样品也可高速离心后取上清备用。当缓冲液中含有有机溶剂(如乙腈、甲醇),需在使用前用低频超声脱气10min。

5 清洗及管道准备

首先将A1管道放入缓冲液或平衡液,binding buffer中,将B1管道放入高盐溶液中或elution buffer,在system control窗口点击工具栏内的manual,选择 pump→pump wash purifier,选中A1,B1管道为ON, execute。泵清洗将自动结束。

6 安装层析柱

在manual里选择pump→flow rate,输入流速1ml/ml,insert;选择Alarm&mon→alarm pressure,设置high alarm(输入填料的耐受压力,可在填料说明书中查到),insert,execute。待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头,稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。

7 开始纯化:

1)选择检测波长,Alarm&mon→Wavelength→UV1,UV2,UV3(可以直打开一个波长)等待柱子平衡好了(观察电导COND,pH的数值和变化趋势)就准备上样了。此时将紫外调零,选择Alarm&mon→autozero,exectue。

2)用样品环上:将样品吸进注射器,推掉气泡,从injectionValve的3号位推入(进样量不得低于样品环的体积的2倍)推好后不要取下注射器。在manual里选择flowpath→injectionValve→inject,execute。

3)用泵上样:(无A2入口)点击pause,将A1放入样品中,点击countine,待样品上完后,再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。(有A2入口)manual里选择flowpath→Ainlet→A2, 待样品上完后,再将)manual里选择flowpath→Ainlet→A1,平衡液中继续清洗柱子

4)选择一种方式

5)洗脱:上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。在manual里选择pump→gradient,按照自己的工艺选择targetB(100%)和length(10CV)。

6)设定收集:

固定体积收集:(如果有)出口阀manual→flowpath→Outlet →F2;选择Frac→Man_fractionation,选择收集Rack型号、收集顺序以及tube类型,输入每管收集体积,exectue。结束固定体积收集选择Frac→fractionation_stop,exectue。

峰收集:选择Frac→Peak_fracParametersUV_Level,设定峰收集的参数,选择Frac→Peak_Man_fractionation设定峰收集每管收集的体积,exectue。结束峰收集选择Frac→Peak_frac_stop,exectue。

8 清洗泵及卸下层析柱:

将A1和B1入口放入纯水中,启动pump wash purifier功能冲洗A泵和B泵及整个管路。然后再将A1和B1入口放入20%乙醇中,同样操作将乙醇冲满整个管路保存。系统给柱子一个慢流速,设置系统保护压力,然后先拆柱子的下端,正在滴水的时候将堵头拧上,再拆柱子的上端,最后拧上上端的堵头。整个过程防止气泡进入。

9 关闭电源:

从软件控制系统的第一个窗口unicorn manager点击退出,其他窗口不能单独关闭。然后关闭AKTA主机电源,关闭电脑电源。

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